INGÉNIERIE DU GÉNOME

Description générale

INGESTEM propose les technologies les plus récentes d’ingénierie du génome, pour transformer de manière stable et efficace des lignées d’iPSC et dérivés cellulaires.

Les techniques de modifications ciblées du génome, utilisant les TALEN (TAL-effecteur nucléases) ou les systèmes CRISPR (régions de répétitions palindromiques courts et régulièrement espacées) / CAS9, permettent d’introduire des mutations ou ou de corriger les altérations génétiques à des endroits génomiques spécifiques. Les nucléases artificielles induisent des cassures, dirigées précisément sur le double-brin de l’ADN. Ce procédé stimule le système de réparation par jonction des extrémités non-homologues prédisposées à l’erreur, ou par recombinaison homologue en utilisant comme matrice une version corrigée du gène d’intérêt.

Appliquée aux cellules souches pluripotentes, cette stratégie est utilisée in vitro ou in vivo pour :

• Corriger une mutation et générer une lignée iPSC et dérivé cellulaire isogénique pour une lignée témoin normal.
• Introduire une mutation ponctuelle et modéliser un variant moléculaire d’une pathologie.
• Intégrer des systèmes rapporteurs dans le génome d’une lignée d’iPSC ou dérivé cellulaire pour suivre un processus cellulaire ou moléculaire ou cribler des chimiothèques sur un phénotype d’intérêt, à travers une activité transcriptionnelle spécifique.
• Modifier l’expression d’un gène (activation ou répression)

Etapes clés de la prestation

1) Conception de la stratégie de modification génomique : Correction génique, excision d’exons ou d’introns, mutagénèse dirigée, insertion de fragments longs.

2) Transformation de la lignée d’intérêt.

3) Contrôle de qualité de la lignée génétiquement modifiée.

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Livrables

• Lignée IPSC génétiquement modifiée

Trois sites

• ESTeam Paris-Sud, Villejuif
• IGBMC, Strasbourg
• PrimaStem, Lyon

Fiche de demande de prestation